日韩精品三级黄片丶-日韩精品三级一区二区-日韩精品三级在线观看-日韩精品三期-日韩精品三区-日韩精品三区四区-日韩精品色色-日韩精品――色哟哟

當(dāng)前位置:主頁 > 技術(shù)文章 > 堿性磷酸酶的分離提取及比活力的測定原理

堿性磷酸酶的分離提取及比活力的測定原理

更新時間:2020-10-09 點擊次數(shù):3066

實驗原理

堿性磷酸酶(alkaline phosphatase EC 3.1.3.1簡稱為ALPase)廣泛存于微生物界和動物界。ALPase能催化幾乎所有的磷酸單酯的水解反應(yīng),產(chǎn)生無機(jī)磷酸和相應(yīng)的醇、酚或糖。它也可以催化磷酸基團(tuán)的轉(zhuǎn)移反應(yīng),磷酸基團(tuán)從磷酸酯轉(zhuǎn)移到醇、酚或糖等磷酸受體上。在磷的生物和化學(xué)循環(huán)過程中,ALPase起了及其重要的作用。在生物體內(nèi)ALPase與磷的代謝直接相關(guān),參與磷與鈣物質(zhì)的消化、吸收、分泌以及骨骼的形成等生理生化過程。ALPase的作用適PH在堿性區(qū)域,一般在PH9.0~10.5范圍內(nèi)。Mg2+對該酶的活力有顯著的激活使用。

為了獲得好的提取效果,在酶的制備過程,特別應(yīng)注意以下幾點:

  1. 選取來源豐富、酶含量高的新鮮材料。提取工作應(yīng)在獲得材料后立刻開始,否則應(yīng)在低溫下保存。
  2. 用鹽分級沉淀是一種應(yīng)用非常廣泛的方法。碳酸銨是常用的鹽。操作時,要注意保持緩沖液的合適PH值和溫度。在加碳酸銨時需事先將其研細(xì),需緩慢加入并及時攪拌溶解,盡量防止泡沫形成,以免酶蛋白在溶液中表面變性。鹽析生成的沉淀,要靜置20min以上,以使沉淀*,然后方可時行離心分離。
  3. 有機(jī)溶劑沉淀法也常用于蛋白質(zhì)的分離提純。丙酮和乙醇是使用廣泛的兩種有機(jī)溶劑。應(yīng)注意在低溫下操作,緩慢加入,充分?jǐn)嚢瑁苊饩植繚舛冗^高放出大量熱量而使酶蛋白變性。離心收集沉淀后,立即將其溶于適量緩沖液中,以避免酶活力的喪失。
  4. 在酶的制備過程中,每經(jīng)一步處理,都需測定酶的活力和比活力。唯有比活力提高較大,提純步聚才有效。

     酶活力的分析:通常是以對—硝基苯磷酸二納(pNPP)為底物,在PH10.1的碳酸鹽緩沖液(含2mmol/L Mg2+)的測活體系中檢測酶催化pNPP水解產(chǎn)生黃色的對硝基苯( pNP)在405 nm處有大的吸收峰,可以根據(jù)OD4〇5值的增加計算酶活力的大小。酶活力定義為在37℃下,以5mmol/L pNPP為底物,在pH 10.1的碳酸鹽緩沖液含2 mmol/L  Mg2+的測活體系中每分鐘催化產(chǎn)生1 mol/L pNP的酶量定為1個酶活力單位。酶的比活力定義為每mg蛋白所具有的酶活力單位數(shù)。

蛋白質(zhì)濃度的測定常采用福林-酚試劑(Folin-Phenolreagem)顯色法,詳見北京來亨科貿(mào)有限責(zé)任公司技術(shù)文章。

 

 

掃一掃,加微信

版權(quán)所有 © 2025北京來亨科學(xué)儀器有限公司
備案號:京ICP備2024080360號-1 技術(shù)支持:化工儀器網(wǎng) 管理登陸 sitemap.xml

主站蜘蛛池模板: 天天干夜夜做 | 欧美一区中文字幕 | 日韩国产人妻一区二区三区 | 久国产| 日本免费无码A专区在线观看 | 国产色婷婷精品免费视频 | 伦理片在线线249 | 福利视频导航网址 | 夜夜精品视频一区二区 | 国产精品国产三级国产普通话对白 | 久久久久久久久一次 | 四川妇女BBBWBBBWM | 欧美一级www片免费观看 | 在线观看网站国产 | 欧美人与性囗牲恔配 | 美女扒开腿让男人桶尿口 | 三级a毛片 | 黄视频在线观看www免费 | 综合图片亚洲综合网站 | 欧美日韩中文国产一区发布 | 亚洲 欧美 中文 在线 视频 | 亚色九九九全国免费视频 | 99热在线获取最新地址 | 五月天色婷婷丁香 | av美女 | 黄色成人免费网站 | 国产亚洲综合成人91精品 | 免费观看电视在线高胜算清 | 李梦大尺度照被曝光 | 樱花草在线观看播放视频www | 欧美成人免费A片爽爽爽 | 美女免费高清观看影视大全 | 蜜桃TV成人网站免费打开 | 欧美日本一道高清二区三区 | 国产人成精品综合欧美成人 | 日本成人免费在线观看 | 一点色成人网 | 日韩性做爰免费A片AA片 | 成人国内精品久久久久影院 | 波多野结衣家庭教师免费观看 | 日产无码AV在线观看 |